不需要。常规慢病毒(Lentivirus)包装和收集过程中,不建议也不需要裂解细胞。
1.为什么不需要裂解细胞?
慢病毒属于出芽型病毒(budding virus)在 293T 等包装细胞中,慢病毒会通过细胞膜持续出芽并释放到培养上清,病毒主要存在于培养上清,而不是细胞内。
👉 裂解细胞反而会带来问题:
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释放大量宿主蛋白、DNA、碎片
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增加毒性,影响后续感染
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降低病毒纯度,干扰滴度检测
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不会明显提高有效病毒产量
2.标准慢病毒收毒流程
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转染 293T 包装细胞(三质粒或四质粒系统)
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转染后 48 h、72 h 分别收集培养上清
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3000 g 离心 10 min 去除细胞碎片
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0.45 μm 滤膜过滤
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直接使用,或进行 PEG 沉淀 / 超速离心浓缩
📌 全程 不裂解细胞
3.那什么时候“裂解细胞”会被提到?
通常是以下情况之一:
1️⃣ AAV 病毒
AAV 多数滞留在细胞内,必须裂解细胞释放病毒。 AAV 要裂解,慢病毒不要
2️⃣ 做病毒相关检测
如:
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Western blot 检测 Gag、p24(用于验证包装)
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不是为了收病毒
3️⃣ 非标准或错误操作
裂解慢病毒包装细胞 ≠ 提高滴度
这是一个常见误区
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